کیت تشخیص آنتی ژن SARS-CoV-2 (ایمونوکروماتوگرافی لاتکس)
دستورالعمل استفاده
کیت تشخیص آنتی ژن SARS-CoV-2 (ایمونوکروماتوگرافی لاتکس) یک روش ایمونواسی جریان جانبی است که برای تشخیص کیفی نوکلئوپروتئین از سواب های بینی SARS-CoV-2، سواب های حلق، خلط، مایع برونکوآلووئولار در نظر گرفته شده است. این توسط متخصصان به عنوان یک آزمایش استفاده می شود و یک نتیجه آزمایش اولیه را برای کمک به تشخیص عفونت با افراد مشکوک به COVID-19 ارائه می دهد.
این آزمایش فقط برای استفاده توسط آزمایشگاههای بالینی یا کارکنان مراقبتهای بهداشتی برای آزمایشات مراقبتی ارائه میشود، و نه برای آزمایش در خانه.
نتایج حاصل از آزمایش آنتی ژن نباید به عنوان تنها مبنای تشخیص یا حذف عفونت SARS-CoV-2 یا اطلاع از وضعیت عفونت استفاده شود. تشخیص باید در ترکیب با علائم بالینی یا سایر روش های آزمایش مرسوم تأیید شود.
خلاصه و توضیح آزمون
کروناویروسهای جدید متعلق به جنس β هستند. کووید-۱۹ یک بیماری عفونی تنفسی حاد است. مردم به طور کلی مستعد هستند. در حال حاضر، بیماران آلوده به کروناویروس جدید منبع اصلی عفونت هستند؛ افراد آلوده بدون علامت نیز میتوانند منبع عفونی باشند. بر اساس بررسیهای اپیدمیولوژیک کنونی، دوره کمون 1 تا 14 روز و عمدتاً 3 تا 7 روز است. تظاهرات اصلی شامل تب، خستگی و سرفه خشک است. گرفتگی بینی، آبریزش بینی، گلودرد، میالژی و اسهال در موارد معدودی دیده می شود.
تشخیص آنتی ژن یک روش رایج برای تشخیص عفونت با کروناویروس جدید است. این تست یک تست تشخیصی ایمونولوژیک است که برای تشخیص آنتی ژن نوکلئوپروتئین SARS-CoV-2 بر اساس روش لاتکس-ایمونوکروماتوگرافی استفاده می شود. استفاده از این روش سریع و راحت است و به تجهیزات کمی نیاز دارد. این روش در عرض 15 تا 20 دقیقه توسط پرسنل با حداقل مهارت قابل انجام است.
اصل تست
این کیت از روش ایمونوکروماتوگرافی لاتکس استفاده می کند.
کارت آزمون شامل:
1. آنتی بادی مونوکلونال نوکلئوپروتئین موش و کمپلکس آنتی بادی کنترل کیفیت برچسب گذاری شده با میکروسفرهای لاتکس.
2. غشاهای نیتروسلولزی بی حرکت با خطوط آزمایش (خط T) و یک خط کنترل کیفیت (خط C).
هنگامی که مقدار مناسبی از نمونه به چاه نمونه کارت آزمایش اضافه می شود، نمونه در امتداد کارت آزمایش تحت عمل مویرگی به جلو حرکت می کند.
اگر نمونه حاوی آنتی ژن SARS-CoV-2 باشد، آنتی ژن به میکروسفرهای لاتکس با برچسب آنتی بادی SARS-CoV-2 متصل می شود و کمپلکس ایمنی توسط آنتی بادی ضد انسانی مونوکلونال تثبیت شده بر روی غشای نیتروسلولز گرفته می شود تا تشکیل شود. یک خط قرمز که نشان می دهد نمونه برای آنتی ژن مثبت است.
معرف های آزمایشی
فرمول اسمی برای هر رسانه به شرح زیر است:
رقیق کننده | کارت آزمون |
آب 90%-99% کلرید سدیم 0.1%-1% سیترات سدیم 0.1%-0.5% توئین-20 0.1%-1% ساکارز 0.1%-1% ترهالوز 0.1%-1% پروکلین-300 0.01%-1% PEG20000 0. -1% دی سدیم فسفات 0.0001-1% سدیم دی هیدروژن فسفات 0.0001-1% | BoraxMESNHSEDC ضد موش |
معرف ها و مواد ارائه شده
مواد ارائه شده:
نام قطعه | 1 تن / جعبه | 20 تن / جعبه | 25 تن / جعبه | 50 تن در جعبه | 100 تن / جعبه |
کارت تست یکبار مصرف | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
خشک کننده | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
سواب | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
رقیق کننده نمونه | 500 لیتر / لوله × 1 | 12 میلی لیتر / بطری × 1 | 15 میلی لیتر / بطری × 1 | 15 میلی لیتر / بطری × 2 | 15 میلی لیتر / بطری × 4 |
قطره چکان پلاستیکی یکبار مصرف | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
لوله | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
یا
نام قطعه | 1 تن / جعبه | 20 تن / جعبه | 25 تن / جعبه | 50 تن در جعبه | 100 تن / جعبه |
کارت تست یکبار مصرف | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
خشک کننده | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
سواب | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
رقیق کننده نمونه | 500 لیتر / لوله × 1 | 12 میلی لیتر / بطری × 1 | 15 میلی لیتر / بطری × 1 | 15 میلی لیتر / بطری × 2 | 15 میلی لیتر / بطری × 4 |
قطره بطری | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
یا
نام قطعه | 1 تن / جعبه | 20 تن / جعبه | 25 تن / جعبه | 50 تن در جعبه | 100 تن / جعبه |
کارت تست یکبار مصرف | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
خشک کننده | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
دستگاه یکبار مصرف | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
کیسه ایمنی زیستی | 1 | 20 | 25 | 50 | 100 |
توجه: یک دستگاه یکبار مصرف حاوی یک سواب و 0.5 میلی لیتر رقیق کننده نمونه است.
مشخصات: 1T / جعبه، 20T / جعبه، 25T / جعبه، 50T / جعبه، 100T / جعبه
مواد مورد نیاز اما ارائه نشده است
1. PPE مانند دستکش، ماسک، روپوش آزمایشگاهی و محافظ چشم
2. مخزن زباله زیستی
3. نگهدارنده لوله
هشدارها و اقدامات احتیاطی
1. برای اورژانس و استفاده توسط متخصصان پزشکی یا بهداشتی فقط در نقاط مشخص شده از مراکز مراقبتی.
2. قبل از انجام آزمایش، بروشور بسته را به طور کامل بخوانید. پیروی نکردن دستورالعمل های درج بسته ممکن است منجر به نتیجه آزمایش نامعتبر شود.
3. هنگام دست زدن و پردازش نمونه ها از لباس های محافظ مناسب استفاده کنید. پس از دست زدن به نمونه، دست ها را کاملا بشویید.
4. با نمونه ها طوری رفتار کنید که گویی حاوی عوامل عفونی هستند مطابق با روش های استاندارد شده و اقدامات احتیاطی جهانی CDC ایالات متحده.
5. اگر لوله/کیسه آسیب دیده یا شکسته است از آن استفاده نکنید.
6. تست فقط برای یک بار استفاده است. تحت هیچ شرایطی مجددا استفاده نکنید.
7. رطوبت و دما می تواند بر نتایج تأثیر منفی بگذارد.
8. توصیه های ذخیره سازی ذکر شده روی برچسب محصول را دنبال کنید. نگهداری و جابجایی خارج از این شرایط ممکن است بر محصول تأثیر منفی بگذارد.
9. از محصول بعد از تاریخ انقضای مشخص شده استفاده نکنید.
10. تمام نمونه ها و اجزای آزمایشی مورد استفاده را در ظروف زباله خطرناک زیستی که به طور مناسب تایید شده و دارای برچسب هستند، دور بیندازید.
عمر مفید و ذخیره سازی
1. بسته بندی اصلی باید در جای خشک و در دمای 30-2 درجه سانتی گراد و دور از نور نگهداری شود.
2. عمر مفید کیت تست 1 سال از تاریخ تولید است. برای تاریخ انقضای ذکر شده به برچسب های محصول مراجعه کنید.
3. پس از باز کردن بسته داخلی، کارت تست به دلیل جذب رطوبت نامعتبر می شود، لطفا در مدت 1 ساعت از آن استفاده کنید.
4. بسته بندی اصلی باید در دمای 2-37 درجه سانتیگراد به مدت 20 روز حمل شود.
جمع آوری و جابجایی نمونه
این آزمایش را می توان با استفاده از سواب های بینی انسان، سواب حلق، خلط، برونکوآلوئولار، لاواژ، مایع و غیره انجام داد. لطفا نمودار را در بخش روش تست ببینید.
روش تست
1. جعبه بسته بندی را باز کنید، بسته داخلی را بیرون بیاورید و بگذارید تا دمای اتاق به حالت تعادل در بیاید.
2. کارت تست را از کیسه مهر و موم شده خارج کرده و ظرف 1 ساعت پس از باز کردن استفاده کنید.
3. کارت آزمون را روی یک سطح تمیز و صاف قرار دهید.
①نمونه ای از سواب بینی SARS-CoV-2، سواب حلق، خلط، مایع لاواژ برونکوآلوئولار. | ②قطره در 500 لیتر (حدود 9-10 قطره) نمونه رقیق کننده از بطری قطره به لوله. نمونه سواب بیمار را در لوله قرار دهید. سواب را حداقل 3 بار بچرخانید در حالی که سر را به سمت پایین و کنار لوله فشار دهید. | ③هنگام برداشتن لوله، سر سواب را به سمت داخل بغلتانید. سواب استفاده شده را در زباله های خطرناک زیستی خود دور بیندازید. |
④ قطره چکان پلاستیکی یکبار مصرف کوچک و شفاف ارائه شده را با نمونه بیمار از لوله پر کنید یا درب آن را روی بطری قطره چکان قرار دهید. | ⑤نمونه 60-100 (2-3 قطره) را در کارت تست بریزید. توجه: نمونه را از لوله نریزید. | ⑥نتیجه را در 15 دقیقه بخوانید. نتیجه در 15-20 دقیقه معتبر است. باید تکرار شود |
یا
①نمونه از سواب بینی SARS-CoV-2، سواب حلق، خلط، برونکوآلوئولار، لاواژ، مایع. | ② هسته ایمنی داخلی را بشکنید و مایع را به انتهای لوله فشار دهید. | ③ نوک سواب را فشار دهید تا نمونه رقیق شود |
④پیچاندن قطره چکان درپوش دم | ⑤حدود 60-100 لیتر (2-3 قطره) رقیق کننده نمونه را روی کارت معرف فشار دهید | نتیجه را در 15 دقیقه بخوانید. نتیجه در 15-20 دقیقه معتبر است. باید تکرار شود |
کنترل کیفیت
1. کارت آزمون شامل یک کنترل رویه داخلی است. این کنترل تأیید می کند که حجم نمونه و تکنیک کافی اعمال شده است.
2. استانداردهای کنترل همراه با این کیت ارائه نمی شود.
3. توصیه میشود که از روشهای خوب آزمایشگاهی شامل افزودن کنترلهای مثبت و منفی به منظور بررسی عملکرد مناسب آزمایش پیروی کنید.
تفسیر نتایج سنجش
1. منفی:
اگر فقط خط کنترل کیفیت C ظاهر شود و خطوط تست T قرمز نباشد، نشان دهنده عدم شناسایی آنتی ژن است و نتیجه منفی است. با توجه به محدودیت حساسیت تشخیص، نتایج منفی ممکن است ناشی از غلظت آنتی ژن کمتر از حساسیت تحلیلی محصول باشد.
2. مثبت:
اگر هم خط کنترل کیفیت C و هم خط آزمایش T ظاهر شوند، نشان می دهد که آنتی ژن شناسایی شده است. نمونه هایی با نتایج مثبت باید با روش(های) آزمایش جایگزین و یافته های بالینی قبل از تشخیص تایید شوند.
3. نامعتبر:
اگر خط کنترل کیفیت C نمایش داده نشود، صرف نظر از اینکه خط تست قرمز وجود داشته باشد، نتیجه آزمایش نامعتبر است و باید دوباره آزمایش شود.
اگر نتایج واضح نبود، آزمایش را با استفاده از نمونه باقیمانده یا نمونه جدید تکرار کنید.
اگر آزمایش مکرر نتیجه نداد، استفاده از کیت را قطع کرده و با سازنده تماس بگیرید.
ویژگی های عملکرد
واکنش متقابل
کیت تشخیص آنتی ژن SARS-CoV-2 (ایمونوکروماتوگرافی لاتکس) برای آنتی ژن H1N1 آنفلوانزا A، آنتی ژن H3N2 آنفولانزا، آنتی ژن آنفلوانزا B، آنتی ژن آدنوویروس، آنتی ژن مایکوپلاسما، آنتی ژن سینسیتیال تنفسی، آنتی ژن استافیلوکوکوس اورئوس اورئوس مثبت، آنتی ژن استافیلوکوکوس اورئوس مثبت آزمایش شده است. نتایج هیچ واکنش متقابلی را نشان نداد.
دخالت
غلظت مشخصی از پاتوژن ها را به نمونه های منفی بالینی اضافه کنید و نتایج آزمایش نباید هیچ واکنش تداخلی داشته باشد. پاتوژن های اضافه شده در جدول زیر نشان داده شده است:
عوامل بیماری زا | تمرکز | عوامل بیماری زا | تمرکز |
ویروس کرونا انسانی 229E | 1,0 × 10 6 pfu / ml | ویروس سین سیشال تنفسی | 1,0 × 10 6 pfu / ml |
ویروس کرونا انسانی OC43 | 1,0 × 10 6 pfu / ml | آدنوویروس | 1,0 × 10 6 pfu / ml |
ویروس کرونا انسانی NL63 | 1,0 × 10 6 pfu / ml | آنفولانزای A H1N1 | 1,0 × 10 6 pfu / ml |
ویروس کرونا MERS | 1,0 × 10 6 pfu / ml | آنفولانزای B | 1,0 × 10 6 pfu / ml |
محدودیت های آزمون
1. این محصول فقط برای ارزیابی کیفی آنتی ژن SARS-CoV-2 است.
2. این آزمایش فقط برای استفاده توسط آزمایشگاه های بالینی یا کارکنان مراقبت های بهداشتی برای آزمایش های مراقبتی ارائه می شود و نه برای آزمایش در خانه.
3. نتایج آزمایش آنتی ژن نباید به عنوان تنها مبنای تشخیص یا حذف عفونت SARS-CoV-2 یا اطلاع از وضعیت عفونت استفاده شود. تشخیص باید در ترکیب با علائم بالینی یا سایر روش های آزمایش مرسوم تأیید شود.
4. نتایج منفی عفونت SARS-CoV-2 را رد نمی کند، به ویژه در افرادی که با این ویروس در تماس بوده اند. برای رد عفونت در این افراد باید آزمایشات بعدی با یک تشخیص مولکولی در نظر گرفته شود.
5. اگر مقدار آنتی ژن ویروس SARS-CoV-2 موجود در نمونه کمتر از حد تشخیص سنجش باشد، یک نتیجه منفی یا غیر واکنشی ممکن است رخ دهد.
6. این آزمایش می تواند SARS-CoV و SARS-CoV-2 را بدون توجه به زنده بودن ویروس (زنده) یا غیرقابل دوام بودن، شناسایی کند. عملکرد آزمایش به مقدار ویروس (آنتی ژن) در نمونه بستگی دارد، اما لزوماً با تیتر آنتی ژن SARS-CoV-2 در نمونه مرتبط نیست.
7. اگر سطح آنتی ژن کمتر از محدودیت تشخیص باشد یا اگر نمونه به طور نامناسب جمع آوری یا حمل شده باشد، ممکن است نتیجه آزمایش منفی رخ دهد.
8.عدم پیروی از روش آزمایش ممکن است بر عملکرد آزمون تأثیر منفی بگذارد و/یا نتیجه آزمایش را باطل کند.
منابع
1. چائولین هوانگ، یمینگ وانگ، و همکاران. ویژگی های بالینی بیماران مبتلا به کروناویروس جدید 2019 در ووهان چین. The Lancet.2020;VOL395:497-506.
2. Zhu N، Zhang D، Wang W، Li X، Yang B، Song J، و همکاران. یک کروناویروس جدید از بیماران مبتلا به پنومونی در چین، 2019. 24 ژانویه 2020. مجله پزشکی نیوانگلند.
3. Lamarre A، Talbot PJ. تأثیر pH و دما بر عفونتپذیری ویروس کرونای انسانی 229E. مجله میکروبیولوژی کانادا. 1989؛ 35 (10): 972-4.
4. Wang C، Horby PW، Hayden FG، Gao GF. شیوع جدید کروناویروس نگران کننده سلامت جهانی است. لانست. 24 ژانویه 2020.